新闻中心

新闻中心

细胞一旦离开活体开始原代培养就会发生变化

Time:2018-10-31 Publisher:

  细胞培养的传代及日常维持过程中,在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费,而且细胞一旦离开活体开始原代培养,它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。

  介绍一下细胞冻存液的制作步骤:

  1、配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液

  2、取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中

  3、离心1000rpm,5min

  CCL[9BOG5X{W3TQ6{S7CJ`1.png

  4、去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的密度为5×106/ml~1×107/ml

  5、将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml

  6、在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者

  7、冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内